La transmission accrue de la tuberculose (TB) multirésistante pose un défi à la prévention et au contrôle de la tuberculose au Sri Lanka. L'isoniazide (INH) est un élément clé du schéma thérapeutique de première ligne contre la tuberculose.

La résistance à l'INH peut conduire au développement de la TB-MR. Par conséquent, la détection précoce de la résistance à l’INH est importante pour freiner la propagation de la résistance. En raison de la disponibilité limitée de méthodes moléculaires rapides pour la détection de la pharmacorésistance au Sri Lanka, cette étude visait à développer une bande de flux latéral simple et rapide à base de nanoparticules d'or (AuNP) pour la détection simultanée de la mutation la plus courante de résistance à l'INH (katG). S315 T, 78,6%) et Mycobacterium tuberculosis (MTb).

Méthodologie

La bande à flux latéral a été conçue sur une couche de support en plastique inerte contenant un tampon d’échantillon, une membrane de nitrocellulose et un tampon d’absorption. 4 sondes de capture marquées à la biotine, qui étaient conjuguées séparément avec la streptavidine, étaient immobilisées sur la nitrocellulose. L'échantillon à tester a été préparé par PCR multiplex en utilisant des amorces pour amplifier la région codon 315 du gène katG et la région IS6110 spécifique de MTb. Les deux sondes de détection complémentaires de l'extrémité 5 'de chaque fragment amplifié ont été conjuguées à des nanoparticules d'or (20 nm) et couplées aux produits de PCR amplifiés ci-dessus ont été appliquées sur le tampon de prélèvement. L'hybridation des régions cibles amplifiées aux sondes de capture respectives a lieu lorsque l'échantillon se déplace vers le tampon d'absorption. L'hybridation positive est indiquée par des lignes de couleur rouges.

Résultats

Les trois sondes de capture immobilisées sur la bandelette (pour la détection de la tuberculose, du type sauvage katG et de la mutation) étaient respectivement de 100 et 96,6% spécifiques et de 100 et 92,1% sensibles.

Conclusion

Le test de flux latéral basé sur AuNP était capable de différencier la mutation spécifique et le type sauvage avec l'identification du MTb en 3 h.

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